荷花(Ｎｅｌｕｍｂｏｎｕｃｉｆｅｒａ)為睡蓮科蓮屬的宿根水生花卉,是中國(guó)的傳統(tǒng)名花和重要的經(jīng)濟(jì)植物。我國(guó)荷花品種資源十分豐富,由于花蓮多為自然雜交或人工雜交品種,播種繁殖難以保持原品種性狀,再者花蓮中的許多品種常因雌雄蕊瓣化而不易結(jié)實(shí),因此,資源圃荷花品種傳統(tǒng)的繁殖及保存方法主要采用分藕和大面積缸栽或池植[1]。但是,荷花的分藕繁殖系數(shù)較低,這個(gè)問(wèn)題現(xiàn)已成為限制荷花種植業(yè)發(fā)展的主要障礙[2,3]。此外,有些品種因生長(zhǎng)勢(shì)弱,品種保存十分困難。為了能充分利用品種資源,及時(shí)為商業(yè)化生產(chǎn)提供大量?jī)?yōu)良種苗,同時(shí)又能為珍貴品種的保存開(kāi)辟新途徑,我們對(duì)一些珍貴荷花品種進(jìn)行了組織培養(yǎng)試驗(yàn),篩選出較為合適的培養(yǎng)基,并獲得了大量荷花組培苗,現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

　　1材料與方法

　　11供試材料

　　試材取自杭州市園文局靈隱管理處曲院風(fēng)荷水生植物資源圃,包括廈門碗蓮、白玉、佛手觀音、佛座和貴妃等5個(gè)珍貴品種。

　　12外植體處理

　　選取以上品種的冬眠種藕,用水沖去污泥,然后將莖尖連葉鞘一起切下,用2%洗衣粉溶液輕輕刷凈,自來(lái)水沖洗30ｍｉｎ后用紗布吸干,剝?nèi)ネ鈱尤~鞘,置于超凈工作臺(tái)上。在75%酒精溶液中浸泡1ｍｉｎ,然后用01%升汞消毒10～12ｍｉｎ,消毒后無(wú)菌水沖4～5遍,再剝?nèi)��?nèi)層葉鞘,接入培養(yǎng)基[4]。

　　13培養(yǎng)基

　　試驗(yàn)中ＭＳ培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,含瓊脂5ｇＬ,ｐＨ值58。在ＭＳ培養(yǎng)基中分別加入赤霉素ＧＡ02ｍｇＬ和不同濃度的細(xì)胞分裂素ＢＡ(02～08ｍｇＬ),培養(yǎng)一段時(shí)間后,觀察不同激素水平對(duì)誘芽的影響。待幼葉長(zhǎng)出后轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基,在ＭＳ培養(yǎng)基中添加不同濃度的ＢＡ(02～10ｍｇＬ)、ＧＡ(0～05ｍｇＬ)和生長(zhǎng)素ＩＢＡ(0～05ｍｇＬ),觀察不同激素水平對(duì)增殖的影響。在相同激素水平的情況下,用固體(加瓊脂5ｇＬ)和液體2種培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)。若干天后,觀察兩者的增殖結(jié)果。將經(jīng)增殖培養(yǎng)后帶有莖段的小苗轉(zhuǎn)入添加ＩＢＡ(0～18ｍｇＬ)或生長(zhǎng)素ＮＡＡ(0～14ｍｇＬ)的生根培養(yǎng)基中,觀察不同激素對(duì)生根的影響。培養(yǎng)室恒溫為25℃,光照強(qiáng)度為2000ｌｘ,每天光照14ｈ。

　　14移栽煉苗

　　將試管苗分別栽入營(yíng)養(yǎng)液(Ｋ∶Ｎ∶Ｐ∶Ｍｇ∶Ｃａ=22∶13∶1∶1∶3)、黃沙、西湖淤泥(西湖淤泥∶泥炭∶基肥=8∶2∶2)等基質(zhì)中,黃沙和西湖淤泥經(jīng)高溫滅菌,使用時(shí)加營(yíng)養(yǎng)液呈稀糊狀,調(diào)查試管苗的成活率。

　　2結(jié)果與分析

　　21不同激素水平對(duì)誘芽率的影響

　　經(jīng)20ｄ培養(yǎng)后結(jié)果(表1)可見(jiàn),各參試荷花品種芽的誘導(dǎo)率均以采用ＭＳ+ＢＡ04(ＢＡ04表示加入ＢＡ04ｍｇＬ,下同)+ＧＡ02誘導(dǎo)培養(yǎng)基時(shí)最高。5個(gè)品種中,貴妃誘導(dǎo)率較低,僅10%～55%。而另4個(gè)品種,采用ＭＳ+ＢＡ04+ＧＡ02誘導(dǎo)培養(yǎng)基時(shí),誘導(dǎo)率均在80%～90%。ＭＳ+ＢＡ02+ＧＡ02處理的誘導(dǎo)率雖然也比較高,但芽細(xì)小,葉柄細(xì)長(zhǎng),生長(zhǎng)勢(shì)弱。ＭＳ+ＢＡ08+ＧＡ02誘導(dǎo)培養(yǎng)基發(fā)出的芽比較粗壯,葉柄短,葉片卷曲、較厚,但誘導(dǎo)率較低,大約14ｄ以后有幼葉長(zhǎng)出。試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn),ＢＡ濃度高于04ｍｇＬ,達(dá)到08ｍｇＬ時(shí),荷花的芽誘導(dǎo)受到了抑制,故誘導(dǎo)培養(yǎng)基以ＭＳ+ＢＡ04+ＧＡ02為好。

　　22不同激素水平對(duì)增殖的影響

　　將已發(fā)芽并帶幼葉的小苗轉(zhuǎn)入不同激素、不同濃度的培養(yǎng)基中培養(yǎng)25ｄ后,發(fā)現(xiàn)廈門碗蓮、白玉、佛手觀音和佛座等4個(gè)品種的大多數(shù)小苗能發(fā)出1～3個(gè)新芽,部分小苗還能長(zhǎng)出莖段,貴妃芽的增殖頻率、芽的平均增殖系數(shù)和發(fā)出莖段的頻率明顯低于其它4個(gè)品種(表2,3,4)。

　　當(dāng)在添加了ＢＡ08ｍｇＬ的ＭＳ培養(yǎng)基中再添加ＧＡ05ｍｇＬ或ＩＢＡ05ｍｇＬ時(shí),除貴妃外,其它4個(gè)品種的芽增殖頻率均在70%～90%。但該2組處理的莖段增殖頻率相差很大,添加ＧＡ05ｍｇＬ的處理除貴妃外,均在55%以上;而添加ＩＢＡ05ｍｇＬ的處理則都在0～10%。由此可見(jiàn),ＢＡ無(wú)論和ＧＡ合用,還是和ＩＢＡ合用,芽的增殖頻率相差不多,但ＧＡ可明顯促進(jìn)莖段的發(fā)生。試驗(yàn)結(jié)果還可以看出,隨著ＢＡ濃度由低到高,芽的增殖頻率也呈現(xiàn)由低到高的趨勢(shì)。至ＢＡ08ｍｇＬ時(shí)增殖率最高,而當(dāng)ＢＡ濃度達(dá)到10ｍｇＬ時(shí),荷花莖段的發(fā)生則受到了抑制。從以上結(jié)果可見(jiàn),荷花的增殖培養(yǎng)基以ＭＳ+ＢＡ08+ＧＡ05較合適。

　　23固體和液體培養(yǎng)基對(duì)增殖的影響

　　用ＭＳ+ＢＡ08+ＧＡ05固體和液體2種培養(yǎng)基同時(shí)繼代10ｄ,都能發(fā)出新芽。繼代25ｄ后,兩者的增殖頻率差別不大(表5),液體培養(yǎng)基的平均增殖系數(shù)略低,但植株健壯,且不干枯;而固體培養(yǎng)基內(nèi)會(huì)出現(xiàn)葉片及葉柄干枯的情況,且植株細(xì)弱。在實(shí)際操作中,兩者交替使用,可達(dá)到好的效果。

　　24不同激素水平對(duì)生根的影響

　　增殖培養(yǎng)25～30ｄ,將帶有莖段的小苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基培養(yǎng)20ｄ后可見(jiàn),不同激素水平的對(duì)荷花根的促生作用有很大區(qū)別(表6),個(gè)別小苗在第7ｄ有根長(zhǎng)出,多數(shù)在20ｄ后長(zhǎng)根。當(dāng)ＩＢＡ濃度分別為06ｍｇＬ、10ｍｇＬ和14ｍｇＬ時(shí),生根率呈現(xiàn)從低到高的趨勢(shì);當(dāng)ＩＢＡ濃度達(dá)到18ｍｇＬ時(shí),生根率下降。試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn),添加ＮＡＡ各處理的生根率都很小。ＬＳＤ法測(cè)定結(jié)果顯示,試驗(yàn)處理中,以ＭＳ+ＩＢＡ14的生根率最高,均在55%以上,最高可達(dá)833%。

　　25試管苗的移栽

　　在移栽試驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn),將已長(zhǎng)根的小苗從瓶中輕輕移出后,須在自來(lái)水中放置2～3ｄ(每天換水),再植入備好的基質(zhì)中,小苗栽植深度以2ｃｍ為宜,移栽14ｄ以后長(zhǎng)出新根,30ｄ后發(fā)出新芽,此時(shí),可逐漸提高水位。在營(yíng)養(yǎng)液、黃沙及西湖淤泥等3種移栽基質(zhì)中,黃沙和營(yíng)養(yǎng)液荷花試管苗成活率分別為556%和455%,以西湖淤泥的成活率最高,達(dá)到727%。

　　3小結(jié)與討論

　　誘芽培養(yǎng)基以選用ＭＳ+ＢＡ04ｍｇＬ+ＧＡ02ｍｇＬ最為理想,既能獲得較高的誘導(dǎo)率,又能保證荷花生長(zhǎng)健壯。增殖培養(yǎng)時(shí),在ＭＳ培養(yǎng)基中添加ＢＡ08ｍｇＬ或ＢＡ10ｍｇＬ與ＧＡ配合使用,能獲得較高的增殖率,但連續(xù)繼代2次以上,會(huì)出現(xiàn)畸型苗,如果和ＢＡ04ｍｇＬ+ＧＡ02ｍｇＬ交替使用,能最大程度地避免這種情況發(fā)生。與此同時(shí),還應(yīng)將固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基交替使用,這樣才能得到多而健壯的小苗。在生根培養(yǎng)中,ＩＢＡ的促生根作用明顯優(yōu)于ＮＡＡ。當(dāng)2種激素的濃度同為14ｍｇＬ時(shí),ＩＢＡ最高生根率能達(dá)到833%,而ＮＡＡ只有133%,所以,荷花生根培養(yǎng)用ＩＢＡ效果較好。廈門碗蓮、白玉、佛手觀音和佛座等4個(gè)品種,在整個(gè)離體培養(yǎng)過(guò)程中生長(zhǎng)情況區(qū)別不大,只有貴妃的誘芽率、增殖率和生根率都較低,這說(shuō)明不同品種材料的異質(zhì)性,應(yīng)考慮調(diào)整培養(yǎng)基的激素水平[5]。試管苗出瓶后,先要在自來(lái)水中放置2～3ｄ洗凈培養(yǎng)基質(zhì),再移入經(jīng)消毒過(guò)的西湖淤泥,成活率可達(dá)727%。