楊永花

(蘭州市園林科學(xué)研究所730070)

垂吊矮牽牛(Petunia—Spreding)為茄科矮牽牛屬的多年生蔓生植物，是近年來(lái)較為時(shí)尚的垂吊型花卉裝飾植物。目前該品系主要依靠從國(guó)外引進(jìn)F1代種子進(jìn)行播種繁殖，但種子價(jià)格昂貴(單價(jià)2.5元/粒)，細(xì)小，播種難度大，種子繁殖又易發(fā)生變異，出現(xiàn)雜色，而扦插繁殖苗分枝力弱，株型單薄，嚴(yán)重影響其觀賞價(jià)值。播種、扦插都難以在短時(shí)間內(nèi)生產(chǎn)出批量的優(yōu)質(zhì)種苗。因此，采用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行快速繁殖，可解決繁殖系數(shù)低、種子價(jià)格昂貴等問(wèn)題，從而滿足市場(chǎng)的大量要求。

　　一、材料與方法

　　1��取材與消毒
　　在日光溫室中選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害植株的幼嫩葉片，作為外植體材料，用自來(lái)水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗2～3次，置于超凈工作臺(tái)上，先用70%的酒精浸泡10秒鐘，無(wú)菌水沖洗一次，再用1‰的升汞消毒5～6分鐘，無(wú)菌水沖洗4～5次，待接種。
　　2��培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件(培養(yǎng)基單位mg/L)
　　試驗(yàn)所選用的培養(yǎng)基為(1)MS+6�睟A1+NAA0.1；(2)MS+6�睟A2+NAA0.2；(3)MS+6�睟A0.5+NAA0.1；(4)MS+KT0.5+NAA0.1；(5)1/2MS；(6)1/2MS+IBA0.1；(7)1/2MS+IBA0.2；(8)1/2MS+NAA0.03。以上培養(yǎng)基中均加入瓊脂3.3g/L，MS中加入白糖30g/L，1/2MS中加入白糖20g/L，pH值均為5.8，培養(yǎng)溫度(25±2)℃，光照強(qiáng)度1500LX～2000LX，光照時(shí)間10～12h/d。
　　3��實(shí)驗(yàn)方法
　　將葉片剪成1cm2大小的方塊，接種在培養(yǎng)基(1)和(2)中，誘導(dǎo)愈傷組織及不定芽的形成。每處理10塊葉片，待外植體萌發(fā)產(chǎn)生密集的不定芽叢后，分割成1cm2大小的方塊，繼代培養(yǎng)在(3)和(4)中，每處理接20塊不定芽叢。培養(yǎng)10天后統(tǒng)計(jì)高于2cm的健壯幼苗，并將高于2cm的健壯幼苗剪切下來(lái)轉(zhuǎn)接到(5)～(8)中進(jìn)行生根，每處理接40棵幼苗，培養(yǎng)一周后統(tǒng)計(jì)幼苗生根情況。當(dāng)生根試苗根系生長(zhǎng)至1cm以上，苗高4～5cm時(shí)進(jìn)行移栽。

　　二、試驗(yàn)結(jié)果

　　1��芽誘導(dǎo)分化
　　接種到培養(yǎng)基(2)中的葉片，培養(yǎng)1周后，葉片邊緣開(kāi)始出現(xiàn)淡綠色愈傷組織，葉片漸變厚并彎曲成拱形狀，2周后愈傷組織上出現(xiàn)綠色突起(即芽點(diǎn))，3周開(kāi)始分化，產(chǎn)生密集的叢生芽，誘導(dǎo)率達(dá)100%。接種到培養(yǎng)基(1)中的葉片培養(yǎng)10天后，葉片邊緣開(kāi)始出現(xiàn)淺綠色愈傷組織，葉片加厚，并膨大凸起。3周后愈傷組織上出現(xiàn)稀少的綠色芽點(diǎn)，1個(gè)月后開(kāi)始分化產(chǎn)生叢生芽，誘導(dǎo)率達(dá)90%。葉片在培養(yǎng)基(2)中比(1)中分化所需時(shí)間短，分化率高，且產(chǎn)生密集的叢生芽。因此，MS+6�睟A2+NAA0.2更適宜葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)。
　　2��芽的增殖繼代
　　繼代于(3)中的葉片不定芽叢培養(yǎng)10天后，每塊不定芽可增殖15～20個(gè)高于2cm的幼苗，但幼苗莖桿細(xì)弱，需經(jīng)過(guò)壯苗培養(yǎng)才能轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根。繼代于(4)中的不定芽叢培養(yǎng)10天后，每塊不定芽均可增殖30～40個(gè)高于2cm的幼苗，且幼苗莖桿粗壯，葉片濃綠，生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，可直接轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根。因此，MS+KT0.5+NAA0.1是叢生芽增殖的最佳繼代培養(yǎng)基。
　　3��生根培養(yǎng)
　　健壯幼苗在生根培養(yǎng)基(5)和(6)中，培養(yǎng)5天后開(kāi)始生根，培養(yǎng)10天后，(5)中幼苗根細(xì)弱，每株平均有12條根，部分幼苗葉尖變白，(6)中幼苗根粗壯，平均有20條根，幼苗生長(zhǎng)旺盛，(7)中幼苗7天開(kāi)始生根，根粗短，平均只有9條根，(8)中幼苗8天開(kāi)始生根，根粗短，平均有16條根，幼苗生長(zhǎng)健壯。因此，從開(kāi)始生根天數(shù)、平均根數(shù)及幼苗生長(zhǎng)勢(shì)看，1/2MS+IBA0.1為幼苗最佳生根培養(yǎng)基，根多而粗壯。

　　三、煉苗與移栽
　　生根苗根系長(zhǎng)至1cm以上，株高4～5cm時(shí)即可進(jìn)行煉苗移栽。移栽前先在自然條件下打開(kāi)瓶口煉苗2～3天，輕取試管苗，用溫水洗干凈根部粘附的培養(yǎng)基，移栽到新的蛭石基質(zhì)中，用1‰的多菌靈溶液澆濕基質(zhì)，用75%的遮蔭網(wǎng)遮蔭保濕，1周后逐漸通風(fēng)透光，生長(zhǎng)適溫控制在22℃左右。

　　四、小結(jié)與討論
　　1��通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)可快速生產(chǎn)出垂吊矮牽牛幼苗，解決了其種子依靠進(jìn)口等問(wèn)題，降低了生產(chǎn)成本，為大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)種苗提供了一條捷徑。生產(chǎn)的植株分植習(xí)性好，葉片濃綠，花色鮮艷，花期長(zhǎng)。
　　2��在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)，垂吊矮牽牛葉片誘導(dǎo)愈傷組織形成叢生芽的最佳培養(yǎng)基為MS+6�睟A2+NAA0��2，最佳增殖繼代培養(yǎng)基為MS+KT0��5+NAA0��1，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0��1。
　　3��生根試管苗根系長(zhǎng)至1cm以上，株高4～5cm時(shí)即可煉苗移植，移栽成活率達(dá)95%以上。